Human immunodeficiency virus (HIV, ВИЧ, вирус иммунодефицита человека) 1, РНК (ПЦР), количественный, кровь

Полимеразная цепная реакция, или ПЦР.

Метод определения в пробах материалов, подвергающихся исследованию, любых ДНК и РНК, в случае неэффективности других методов.

Суть этого метода звучит в самом названии.

Поначалу исторический экскурс.

Автор разработки Кэри Мюллис, заработал Нобелевскую премию за работу 1983 года.

Первоначально планировалось научное применение метода, но впоследствии он завоевал свое место и в диагностической медицине.

Этим методом можно определять генетический материал всевозможных инфекций.

Гинекологические и урологические труднодиагностируемые инфекции выявляются этим методом.

Очень часто ПЦР используется для диагностики ВИЧ.

Основы метода, на основании которых работает исследование, основаны на уникальности фрагмента ДНК для каждой инфекции.

В случае с ВИЧ это РНК.

Руководствуясь принципом комплементарности, эталонный участок ДНК или РНК делает обнаружение «своего» фрагмента.

И создает большое количество копий этого фрагмента ДНК (или РНК).

Геометрическая прогрессия определяет число копий в течение цикла ПЦР (около 3-х минут).

По прошествии нескольких часов число фрагментов – несколько миллиардов.

Теперь несложно определить и возбудителя инфекции.

Метод силен своей универсальностью.

Для определения фрагментов ДНК (или РНК) возбудителя любой инфекции всегда используется одно и то же стандартное оборудование.

ПЦР славится и своей специфичностью (практически 100%).

Можно использовать один и тот же исследуемый материал для поиска разных возбудителей заболеваний.

У метода очень высокая чувствительность и оперативность.

Всего в течение дня, можно узнать, есть ли возбудитель в организме и какой.

Инкубационный период не мешает проведению исследования.

Нет еще клиники заболевания и антител в крови, но есть ДНК или РНК конкретного возбудителя в организме подвергающегося исследованию.

К недостаткам метода нужно отнести высокую квалификацию врача, берущего материал для исследования, и лаборанта, проводящего исследование.

Также важна высокая чистота помещения, в котором проводят исследование (практически 100%), чтобы результаты исследований были достоверными.

Для ИППП существуют специальные комплексные исследования, при которых определяют наличие сразу нескольких возбудителей.

А теперь поговорим о перспективах ПЦР для диагностики ВИЧ-инфекции.

Когда делают ПЦР на ВИЧ

От четырех до четырнадцати дней спустя, после инфицирования, можно обнаружить ВИЧ данным методом.

Достоверность результата оценивают, когда минуло четырнадцать дней спустя опасной половой связи.

Наличие отрицательного результата говорит о достоверности проведенного исследования.

Но для того чтобы получить непререкаемый результат исследования проводят еще и ИФА.

ПЦР является высокочувствительным методом, в основе которого лежит амплификация (усиление) небольшого участка провирусной ДНК (или РНК) за счёт праймеров.

Праймеры – это специальные реагенты.

Желательная (не обязательная) процедура взятия венозной крови на исследование на ВИЧ-инфекцию.

Проведение ПЦР для диагностики достаточно дорогостоящий анализ.

Его делают не всегда, а в особых случаях.

И если случилась медицинская авария, в которой есть ВИЧ-инфицированные и возможно заразившиеся.

Спустя четырнадцать дней достоверность на наличие ВИЧ-инфекции порядка 98%.

По истечении пяти дней после предполагаемого заражения — 80%.

Анализ ИФА можно делать только тогда, когда появятся антитела к ВИЧ в крови.

Проходит от одного до трёх месяцев, иногда до года.

Поэтому если есть озабоченность по поводу ВИЧ инфицирования, лучше не тянуть, а сделать этот дорогостоящий, но такой необходимый анализ.

Важно знать диагноз как можно раньше.

ПЦР анализ на ВИЧ рассказывает подполковник медицинской службы, врач Ленкин Сергей Геннадьевич

Содержание данной статьи проверено и подтверждено на соответствие медицинским стандартам врачем дерматовенерологом, урологом, к.м.н.

Ленкиным Сергеем Геннадьевичем

Как делают

Нахождение ВИЧ в пробах крови методом ПЦР выполняется двумя вариантами:

• исследуется провирус ВИЧ-инфекции, точнее его ДНК
• исследуется плазма или сыворотка крови на РНК ВИЧ-инфекции

Периферическая кровь, точнее ее мононуклеарные клетки, исследуются на содержание провируса.

По причине того, что ИФА дает вероятность выше 98% — 99,9%, ПЦР не является 100% подтверждающим анализом на наличие ВИЧ-инфекции.

Большой процент ложноположительных срабатываний зависит и от чистоты лаборатории, где проводят исследования, и от квалификации проводящего исследования.

ПЦР на ВИЧ-инфекцию – единственная диагностика до появления антител к ВИЧ.

То есть до минимум трёх месяцев с начала инфицирования.

Прогресс заболевания ВИЧ-инфекцией характеризуется нарастанием количества вируса в крови.

Проведение ПЦР говорит о стадии заболевания ВИЧ и эффективности антиретровирусной терапии.

Помимо вышеперечисленных условий, есть обязательные исследования крови на ВИЧ-инфекцию для:

• новорожденных от ВИЧ-инфицированной матери
• наблюдения за концентрацией ВИЧ-инфекции

Все остальные условия являются необязательными.

Процедура сдачи ПЦР для диагностики наличия ВИЧ-инфекции в организме проста.

Берется венозная кровь и проводится анализ.

Нужно воздержаться от употребления любых продуктов около десяти часов.

Не употреблять алкоголь, ограничить физическую активность, исключить эмоциональные нагрузки.

Для этого нужна очень чистая лаборатория.

При получении положительного результата его обязательно перепроверяют.

Для этого используют референц-лабораторию.

Там проводят более точный исследовательский способ диагностики.

К сожалению, универсальность не 100%, и зачастую результат анализа ложноположительный.

Его используют вспомогательным методом для установления наличия или отсутствия ВИЧ-инфекции в организме.

Результаты анализов

Есть много поводов для исследования на наличие ВИЧ-инфекции в организме.

Предстоящая операция, планирование беременности, наличие в анамнезе случайных половых связей и другие похожие причины.

Есть категории работников (например, медицинские работники, учителя и другие) для которых эта процедура необходима, для допуска работы с людьми.

Есть определенная тревожная симптоматика, при которой анализ на ВИЧ-инфекцию проводят:

• при резкой потере веса
• при длительной диарее (около 3-х недель)
• при лихорадке невыясненной этиологии
• при росте лимфоузлов в разных местах
• при лимфо- и лейкопении
• при наличии необъяснимой пневмонии, системном кандидозе, туберкулезе, манифестном токсоплазмозе и других серьезных заболеваниях

Интерпретацией результатов проведенных анализов занимается только лечащий врач.

Еще интересней:

Эффективные уколы от простатита

Является ли дюфастон гормональным средством

Какой бы ни был результат — это не повод заниматься лечением самостоятельно.

К тому же результат ввиду несовершенства метода может быть как ложноотрицательным, так и ложноположительным.

Иногда схожие результаты анализов у разных людей свидетельствуют о различной клинике.

Чаще делают количественный ПЦР-анализ на ВИЧ-инфекцию.

Этот анализ дает сведения о количестве вируса и отображается единицей копия/мл.

Расшифровка результатов:

• РНК вируса отсутствует или его очень мало (около 20 копий/мл)
• мизерное количество РНК (чуть больше 20 копий/мл)
• 20 – 10 6 копий/мл
• более чем 10 6 копий/мл

Самый опасный третий и четвертый результат.

Что делать, если результат анализа ПЦР на ВИЧ положительный

Анализы на ВИЧ-инфекцию делают в несколько этапов.

Это занимает период от двух до десяти дней.

Результаты анализов делятся на положительные, отрицательные и сомнительные.

Если результат сомнительный, то немного позже обязательно делают анализ еще раз.

Но даже положительный результат не окончательный.

Пересдача крови на анализ тоже делается.

На достоверность результата влияние оказывает некоторые заболевания и состояния организма.

Проведение анализа может быть конфиденциальным или анонимным.

При конфиденциальном обследовании имя обследуемого человека называется.

При анонимном обследовании анализ делают по идентификационному номеру.

Результат анализа может узнать только подвергшийся обследованию человек.

Даже положительный результат остается тайной.

Это врачебная тайна, и она не может быть нарушена.

Но даже подтвержденный положительный результат еще не приговор.

В современных условиях ВИЧ-инфицированные подвергаются пожизненной антиретровирусной терапии, что позволяет сохранить им жизнь.

Наоборот, чем раньше обнаружено наличие ВИЧ-инфекции в организме, тем плодотворнее будет лечение.

Нормы

У здорового человека иммунный показатель CD-4 составляет 400-500 – 1600 клеток/мл. Если цифра уменьшается до 200-500, меняется каждые полгода на 45 единиц – высока вероятность инфицирования. Но учитывается и возможность заболеваний, влияющих на иммунные процессы, беременность и грудное вскармливание у женщин.

Также анализ крови на ВИЧ имеет нормы и для инфицированных людей. Если показатель клеток снизился до 350, пора начинать терапию. Благодаря этому не разовьются опасные для инфицированных людей сопутствующие заболевания.

Если цифра снизилась до 200 единиц, часто назначают высокоактивную антиретровирусную терапию. Страдающим иммунодефицитом советуют сдать анализы на ВИЧ и гепатит. Заболевания печени часто сопутствуют опасному вирусу, усугубляют состояние иммунитета.

Важно! Половина случаев инфицирования диагностируется после того, как был проведен анализ крови на гепатит, rw и ВИЧ: после постановки женщины на учет по беременности, во время профосмотров, перед сдачей донорской крови.

Перспективы метода в диагностике ВИЧ-инфекции

ПЦР относится к молекулярно-биологическим методам исследования.

Помимо диагностики ВИЧ-инфекции и ИППП, метод зарекомендовал себя в генетических разработках, в ветеринарной науке, сельском хозяйстве.

Продукты питания исследуют на содержание ГМО с помощью ПЦР.

Также сфера применения метода судебно-медицинская экспертиза.

Но все же нас интересуют, в первую очередь, перспективы ПЦР для постановки диагноза наличия ВИЧ-инфекции.

С помощью ПЦР выявляются даже единицы ВИЧ присутствия в крови.

Анализ характеризуется очень высокой чувствительностью – от одного до ста единиц ВИЧ.

Выраженная уникальность происходит за счет того, что идет поиск специфичной ДНК (или РНК) присущий конкретному возбудителю заболевания.

Реакция протекания операции копирования фрагментов РНК характеризуется высокой специфичностью метода ПЦР.

Поэтому амплификационная тест-система (ПЦР) выигрывает перед другими тест-системами иммунологического характера (например, ИФА).

Потому что нет «войны» между антигенами.

Еще важна и скорость ПЦР анализа.

Один рабочий день уходит на проведение ПЦР.

Но есть у метода и негативные качества.

Если ВИЧ-инфекция попадет в исследуемую кровь случайно, из воздуха, при ее отсутствии в организме, реакция копирования вируса все равно будет идти.

Поэтому и нужна такая стерильность в лаборатории, в которой проводиться ПЦР.

Благодаря большому непостоянству генетического материала ВИЧ уменьшаются диагностические показатели чувствительности.

Хотя сам метод очень чувствительный.

Чувствительность метода ПЦР характеризуют 98%. У ИФА этот показатель выше – 99%.

А за данными статистики или вовремя не продиагностируемые заболевшие или, наоборот, неправильно продиагностируемые о наличии в организме ВИЧ-инфекции.

Для лабораторий, в которых ПЦР проводиться, разрабатываются специальные системы внутреннего контроля, с целью повышения качества диагностики.

На основе стандартизированных межлабораторных панелей качества минимализируют ошибки тестирования.

Если все сделано правильно, без ошибок, то с помощью ПЦР можно определить только один фрагмент провируса на десять тысяч – сто тысяч лимфоцитов.

Методом определяют и резистентность к препаратам антиретрорвирусной терапии.

Конечно, метод несовершенный, но у него большие перспективы.

Особенно на ранних стадиях инфицирования, когда в крови еще нет антигенов.

Метод хоть и недешевый, но правильно проведенный, с соблюдением всех условий правильной постановки, очень информативный.

За ним — большое будущее.

В умелых руках ПЦР мощный диагностический инструмент.

Главное – уметь им пользоваться и избегать всевозможных ошибок.

Вирус иммунодефицита является одним из самых опасных заболеваний современности. И неизвестно, что в большей степени огорчает людей – то, что ученые и специалисты в области медицины до сих пор не смогли найти вакцину от страшного недуга, или то, что уровень заболеваемости растет с каждым годом и месяцем. Большую роль в области исследования СПИДа играет его диагностика. В мировой медицине сегодня используют несколько методов выявления данного недуга. Однако не во всех случаях они оказываются эффективными. Ведь исследование вируса иммунодефицита необходимо и в том случае, когда пациент уже знает о своем диагнозе. Наиболее эффективным для этого считается анализ ДНК ВИЧ. В чем заключается суть этого исследования, и в каких случаях оно используется?

РНК вируса иммунодефицита человека 1 типа (ВИЧ-1), количественно (ПЦР real time)

Human immunodeficiency virus (вирус иммунодефицита человека, ВИЧ, HIV) — лентивирус (вирус с медленной репликацией), который вызывает синдром приобретенного иммунодефицита. СПИД — заболевание, при котором иммунная система человека не в состоянии защитить организм от жизненно опасных оппортунистических инфекций и онкологических заболеваний. ВИЧ поражает Т-лимфоциты, встраивая участок вирусной ДНК в геном инфицированного. Пути передачи инфекции — половой, при переливании крови, от зараженной матери к новорожденному. Вирус присутствует в крови, эякуляте (сперме), преэякуляте, вагинальных выделениях, грудном молоке. Изучены два типа ВИЧ: ВИЧ-1 и ВИЧ-2. ВИЧ-1 более вирулентный (способный заражать), инфективный (способный внедряться в организм) и повсеместно распространенный. ВИЧ-2 из-за его достаточно низкой агрессивности распространен в Западной Африке. Первые клинические симптомы при ВИЧ-1 проявляются раньше, чем при ВИЧ-2. Инкубационный период обычно составляет 3-6 недель. Максимальная вероятность обнаружения HIV в крови наступает через 12 недель после заражения. Симптоматика острой инфекции появляется в 40-60% случаев заражения ВИЧ-инфекцией и включает субфебрильную температуру, боль в горле, увеличение лимфатических узлов, сыпь. Сыпь появляется в 20-50% случаев и представляет собой плотные папулы, похожие на кореподобную сыпь. Возможно появления диспепсических симптомов — тошноты, рвоты, диареи, а также неврологических расстройств — периферической нейропатии (нарушений чувствительности). Продолжительность клинических проявлений различна, но обычно период составляет 1-2 недели. Латентная стадия, при которой HIV не вызывает никаких симптомов, при отсутствии лечения может длиться от трех до 20 лет (в среднем около 8 лет). Без получения антиретровирусной терапии у 50% инфицированных ВИЧ-инфекция переходит в СПИД через 10 лет после заражения. Смерть наступает от оппортунистических (проявляющихся при снижении иммунитета) инфекций или злокачественных заболеваний. Геномы ретровирусов, к которым относится и ВИЧ, состоят из РНК. Знание уровня РНК вируса в сыворотке необходимо для определения степени вирусной нагрузки, уровня вирулентности (агрессивности) ВИЧ-1 и широко применяется для оценки ответа вируса на проводимое лечение. Определение уровня РНК не используют для диагностики ВИЧ-инфекции.

ПЦР ДНК ВИЧ: суть исследования и подготовка к нему

Анализ ДНК на ВИЧ производится посредством ПЦР. Полимеразная цепная реакция – это метод, который используется для выявления генетических патологий, инфекций, патогенных микроорганизмов и в том числе, вируса иммунодефицита. Для исследования у пациента берут кровь из вены. За три-четыре дня до ее сдачи, человеку рекомендуют воздержаться от приема жирной пищи, алкоголя. Забор крови осуществляется натощак.

Провирусная ДНК ВИЧ определяется в несколько этапов. Сыворотку или плазму крови помещают в специальный лабораторный прибор, в котором она расщепляется на молекулы. Полученную дезоксирибонуклеиновую кислоту пациента сравнивают с ДНК вирусов нескольких типов. На основании их совпадений или несовпадений можно сделать выводы о наличии и отсутствии заболевания, его типе и количественном составе. Провирусная ДНК ВИЧ норма сравнивается с результатом.

Анализ ПЦР ДНК ВИЧ: сфера использования, достоверность

Как уже говорилось выше, для выявления вируса иммунодефицита метод исследования дезоксирибонуклеиновой кислоты применяется редко. Это дорогостоящий анализ, который не нашел широкого применения в современной медицине. Используется он главным образом в педиатрии. Медикам давно известно, что ДНК содержит ВИЧ. У детей, которых вынашивали инфицированные матери, заражение происходит разными способами. Речь идет о внутриутробном инфицировании, заражении через родовые пути, а также передаче заболевания через грудное молоко уже после рождения. Стоит отметить, что около тридцати – тридцати пяти процентов детей, вынашивали и рожали которых инфицированные матери, рождаются здоровыми.

ПЦР ДНК на ВИЧ у них берется в первые десять дней жизни. С помощью этого анализа выясняют, вырабатывает ли организм младенца антитела к вирусу иммунодефицита, а также производят качественное сравнение с генным материалом матери. Дело в том, что результат иммуноферментного анализа может оказаться положительным, поскольку иммунная система ребенка, находившегося в утробе инфицированной матери, в качестве защитной реакции может вырабатывать антитела к вирусу. Именно их сравнение с генным материалом матери позволяет определить болен ребенок или здоров.

Для сравнения и определения типа вируса используется ДНК ВИЧ качественный. А для определения вирусной нагрузки производится количественный анализ. Его проводят для того, чтобы узнать, каким образом ведет себя болезнь в той или иной стадии. Это необходимо для того, чтобы врач принял решение о применении антиретровирусной терапии и правильно подобрал ее схему. Убить ДНК клетки ВИЧ при помощи лекарств, конечно, не удастся, как и избавиться от заболевания. Но с помощью терапии можно существенно продлить латентную стадию недуга и избавить человека от мучительных симптомов.

ПЦР на ВИЧ – один из самых информативных методов молекулярно-генетического диагностирования. Этот способ помогает выявить у пациента разного рода инфекционные недуги и заболевания, которые передаются по наследству. Этот же метод диагностики применим в случае проверки биоматериала на присутствие ВИЧ – тяжелого заболевания, развивающегося на протяжении всей жизни пациента. С медицинской помощью ПЦР оказалась в числе рекомендуемых анализов, проводимых на платной основе при подозрении на вирус иммунодефицита человека. Однако достоверность исследования оправдывает себя только в 80 из 100 случаев.

ДНК-тест на устойчивость к ВИЧ

О том, что человеческий организм по-разному реагирует на ВИЧ, стало известно вскоре после появления СПИДа. «Ученые выяснили, что существует иммунный портрет, который делает людей более или менее чувствительными к вирусу иммунодефицита.

Научно доказано, есть определенная доля людей устойчивых к определенному виду инфекции. Иначе бы истреблён был род человеческий вирусами.

Небольшая часть людей имеет частичную или полную врожденную генетическую устойчивость к ВИЧ, вирусу, вызывающему СПИД. Основным механизмом является мутация гена, кодирующего CCR5, который действует как корецептор ВИЧ. По оценкам учёных, доля людей с той или иной формой устойчивости к ВИЧ составляет менее 1% населения.

Впервые эта устойчивость была обнаружена в 1994 году Стивеном Кроном, когда он обнаружил, что полностью устойчив к ВИЧ во всех тестах, несмотря на постоянные контакт высокого риска с ВИЧ-инфицированными. Резистентность Крона была результатом отсутствия рецептора, который предотвращает заражение ВИЧ клеток CD4, присутствующего на внешней стороне белых кровяных клеток. Отсутствие таких рецепторов, или, точнее, их неработоспособность, известна как мутация Delta 32. Эта мутация связана с группами людей, которые были подвержены заражению ВИЧ, но остаются незараженными, такими как некоторые дети ВИЧ-позитивных матерей, медицинские работники и секс-работники.

Мутация может возникнуть одновременно в обеих парных хромосомах или только в одной.

• Если выпадение 32 нуклеотидных оснований из гена CCR5 происходит сразу в обеих хромосомах, то носители такой мутации практически невосприимчивы к ВИЧ. По крайней мере, среди них до сих пор не зафиксировано ни одного случая заражения. Ведь рецептора CCR5 на поверхности клетки в таком случае просто нет.
• Во втором случае, когда соответствующая мутация возникает только в одной хромосоме из пары, возможность распространения ВИЧ в организме тоже уменьшается. Белки-рецепторы CCR5 отсутствуют ровно в половине клеток: значит, вирусу иммунодефицита труднее проникнуть в них.

В 1996 году, обследуя людей, оказавшихся неспособными к заражению ВИЧ, американские ученые обнаружили у подавляющего большинства «поломки» в гене белка-рецептора CCR5. Этот рецептор находится преимущественно на поверхности иммунных клеток и настроен на хемокин — низкомолекулярный белок, активирующий лимфоциты и помогающий рекрутировать их в место инфекции или воспаления.

Однако ВИЧ использует этот рецептор с другой целью — для того, чтобы проникнуть в клетки организма. Конечно, мутация в гене, кодирующем белок, чаще всего связана с каким-то дефектом. Но выяснилось, что иногда новый вариант гена может оказаться полезным. В случае CCR5 выпадение из генетической цепочки 32 нуклеотидов приводит к тому, что белок-рецептор, образующийся в результате, сильно укорочен и не появляется на поверхности клетки, а значит, вирус иммунодефицита не может эффективно использовать его для атаки.

Полимеразная цепная реакция

ПЦР диагностика на ВИЧ расшифровывается как полимеразная цепная реакция. Для исследования данного вида применяются различные типы биологических материалов. Среди них кровь, кроме этого может использоваться секреция из влагалища пациентки или семенная жидкость у мужчин.

Внимание! Слюна для ПЦР при диагностике ВИЧ не используется. Подобный подход признан неэффективным, поскольку в этом материале антитела к ВИЧ находятся в минимальной концентрации. Это же касается мочи, пота и слез.

Показанием к проведению описываемого исследования, является дважды положительный ИФА (иммуноферментный анализ). Об альтернативных назначениях речь пойдет позже.

Подробно о сути анализа

В основе анализа на ВИЧ методом ПЦР лежит возможность нуклеиновой кислоты самостоятельно репродуцироваться. Живые клетки состоят из белка и этих самых кислот, иначе говоря, из РНК и ДНК. Молекулы выступают в роли хранителей генетического кода. При низкой концентрации вирусных частиц (ВИЧ) в биоматериале, проба включает не целые цепочки ДНК (дезоксирибонуклеиновой кислоты), а только их составляющие, называемые нуклеотидами. Анализ позволяет выявить даже незначительные остатки клеток вируса. Именно этим фактом объясняется способность ПЦР демонстрировать результат на ранних сроках – спустя несколько недель после заражения ВИЧ.

Наиболее качественных результатов от проведения полимеразной цепной реакции стоит ждать при исследовании венозной крови. Пробу расщепляют с помощью оборудования. Затем фракции подвергаются ферментной обработке. Реактивные вещества, объединившись с частицами вирусной ДНК, дублируют ее. Число таких элементов возрастает по принципу цепочки, пока их наличие (не антител) в крови пациента не станет заметно лаборантам. По точно такому же принципу не работает ни один из существующих способов диагностики.

Компоненты реакции

С помощью метода ПЦР можно заблаговременно узнать о развитии вируса в организме. Почему же его нельзя назвать популярным в области бесплатной медицины и делать повсеместно? Дело в том, что такой тест на ВИЧ весьма затратный и требует наличия следующих компонентов:

• матрица дезоксирибонуклеиновой кислоты, включающая отрезок ДНК, предназначенный для амплификации;
• два праймера (для каждого цепного отрезка);
• химически активный компонент полимераза для ускорения полимеризации вирусных частиц;
• дезоксирибонуклеозидтрифосфаты;
• частицы двухвалентного магния (заряженные);
• специальный раствор для создания благоприятных условий, обеспечивающий должный уровень кислотности, солевой концентрации, количества частиц магния в жидкости.

Анализ ПЦР (Полимеразная цепная реакция) при ВИЧ

Чтобы понять суд метода полимеразной цепной реакции, нужно вспомнить особенность строения клеток еще из школьного курса.

Любая живая клетка содержит белок и два типа нуклеиновых кислот: ДНК и РНК. Они являются наиважнейшими клеточными структурами, поскольку содержат генетическую информацию, закодированную специальным образом.

ДНК-код представляет собой строгую последовательность микроструктур, которые образуют длинную цепочку.

Справка! В качестве основы ПЦР используется возможность нуклеиновой кислоты самостоятельно репродуцироваться.

Когда вирус проникает в здоровые клетки, он разрушает цепочки ДНК.

В этом случае клетка уже не будет содержать целостные цепочки, а лишь небольшие фрагменты — нуклеотиды. Кроме этого, даже малейшие частички вируса будут видны.

Именно на обнаружении поврежденных цепей ДНК и остаточных клеток и построен метод полимеразной цепной реакции.

При этом существует две разновидности ПЦР-диагностики:

• Качественная. Подходит тем, у кого диагноз не подтвержден: он просто показывает, присутствует ли вирус в клетках.
• Количественная. Пациент получает результат «ДНК вируса не обнаружено», что означает отсутствие ВИЧ, или же информация о присутствии возбудителя, что означает ВИЧ-инфицирование человека.

Если подтвержденный диагноз имеется, назначается количественный анализ. С его помощью определяется количество копий РНК (ДНК) вируса в крови (клетках). Количественный анализ позволяет оценить эффективность лечения у ВИЧ-инфицированных, определить выраженность заболевания, его прогрессирование.

Какие методы диагностики позволяют выявить ВИЧ-инфекцию рассказывается на видео:

Преимущества и недостатки методики ПЦР при ВИЧ

Для объективной оценки метода в таблице ниже приведем ряд преимуществ и недостатков исследования:

– универсальность (для проведения исследования используют не только кровь, но и влагалищные выделения, сперму)

– обширный спектр методики (одну пробу биологического материала можно проверить на несколько болезней)

– скорость получения результата (пациент получает ответ на следующие сутки – более оперативны в этом плане экспресс-методы)

– высокая чувствительность (возможна диагностика на ранних этапах развития ВИЧ, чего не скажешь об ИФА или общем анализе крови на инфекцию)

– отсутствие возрастных ограничений (такой анализ крови на ВИЧ можно брать и у ребенка с момента его рождения)

– необходимость использования высокотехнологичного оборудования

– 20 % получения ложноположительных результатов (по причине высокой чувствительности метода)

Очевидно, преимуществ методики больше. Если оценивать тип диагностики с точки зрения продуктивности дальнейшего лечения и возможности продления жизни пациенту, ПЦР – самый верный путь к успеху.

Плюсы ПЦР при ВИЧ

Достоинствами метода являются крайне малая вероятность ложноположительного результата, универсальность реакции для любых биологических жидкостей организма. Анализ имеет широкий спектр:

• Один забор крови можно использовать для выявления разных инфекций.
• Методика относится к срочным, результат бывает готов уже на следующий день.
• Достоверность составляет от 85 до 98%.
• Наличие ВИЧ можно определить через 10-14 дней после заражения (антител при этом сроке еще нет).
• Нет возрастных ограничений, проводить можно сразу с момента рождения.

Особенности анализа

Основная особенность описываемого анализа состоит в его способности к ранней диагностики ВИЧ, на что не способны другие методы исследований. Через сколько дней после предполагаемого инфицирования можно сдавать кровь на ПЦР? Обычно этот временной промежуток составляет 10-14 дней. В течение следующих 24 часов пациент получает результат. Возможные отклонения в сроках объясняются индивидуальными условиями работы диагностических центров, клиник.

Назначение исследования

ПЦР в большинстве своем проводится в целях выявления ВИЧ (синдрома иммунодефицита человека). Однако анализ можно сдать и при подозрении на развитие заболеваний, которые передаются половым путем. Этот же метод применим и в случае диагностики наследственных болезней.

ПДР-диагностика: причины для проведения

Когда следует сдавать кровь на ПЦР? Биологический материал в большинстве случаев сдается, когда вирус иммунодефицита человека приспособился к условиям организма, простимулировал выработку антител и вызвал первые симптомы ВИЧ. Однако подобное оправдано лишь в случае истечения достаточного количества времени после заражения и предполагает проведение ИФА.

Необходимость же в ПЦР возникает по инициативе пациента, который желает оперативно диагностировать заболевание (если таковое имеет место быть). Причиной тому может быть: незащищенный половой акт, контакт с биологическим материалом инфицированного, недавнее переливание крови и пр.

Обнаружение вируса иммунодефицита человека

ВИЧ в материале в норме отсутствует.

Метод ПЦР для обнаружения РНК ВИЧ может быть качественным и количественным. Качественное обнаружение РНК вируса иммунодефицита человека с помощью ПЦР используют в следующих случаях:

■ неонатальный скрининг;

■ подтверждение результатов скринингового серологического исследования;

■ скрининг пациентов с высоким риском инфицирования;

■ разрешение сомнительных результатов по иммуноблоттинговому исследованию;

■ контроль эффективности противовирусного лечения;

■ определение стадии заболевания (переход инфицированности в заболевание).

Прямое количественное определение РНК ВИЧ с помощью ПЦР позволяет более точно, чем определение содержания СБ4+-клеток, предсказать скорость развития заболевания у лиц, инфицированных ВИЧ, следовательно, более точно оценить их выживаемость. Высокое содержание вирусных частиц обычно коррелирует с выраженным нарушением иммунного статуса и низким содержанием СБ4+-клеток. Низкое содержание вирусных частиц обычно коррелирует с более благополучным иммунным статусом и более высоким содержанием СБ4+-клеток. Содержание вирусной РНК в крови позволяет предсказать переход заболевания в клиническую стадию. Вероятность развития СПИДа в 10,8 раза больше у лиц с содержанием ВИЧ-1 в крови более 10 000 копий/мл, чем у лиц с содержанием ВИЧ-1 в крови ниже 10 000 копий/мл. При инфекции ВИЧ прогноз непосредственно зависит от уровня виремии. Снижение уровня виремии при лечении улучшает прогноз заболевания.

Группой экспертов США разработаны показания для терапии пациентов с ВИЧ. Лечение показано пациентам с количеством СБ4+-клеток в крови менее 300 в 1 мкл или уровнем РНК ВИЧ в сыворотке выше 20 000 копий/мл (ПЦР). Оценку результатов антиретровирусной терапии лиц, инфицированных ВИЧ, проводят по снижению содержания сывороточной РНК ВИЧ. При эффективном лечении уровень виремии должен снижаться в 10 раз в течение первых 8 нед и быть ниже предела чувствительности ПЦР (меньше 500 копий/мл) через 4-6 мес после начала терапии.

Обновлено: 2019-07-09 21:47:32

• Все методы, используемые для искоренения аномалий рефракции, представляют собой лишь различные способы достижения расслабления. Большинство людей, хотя
• Все методы, используемые для искоренения аномалий рефракции, представляют собой лишь различные способы достижения расслабления. Большинство людей самым легким
• Психическое здоровье Личная гигиена Сон Рациональное питание Здоровый образ жизни далее Со временем вы обнаружите, что здоровый образ жизни становится
• Климаксом, или климактерическим периодом, называют период возрастного перехода от зрелости к пожилому возрасту. Симптомы: климакс сопровождается разнообразными
• Показания к назначению. Различные заболевания при отсутствии показаний к назначению специальной лечебной диеты при условии нормального состояния желудочно-кишечного тракта.
• Искривлением позвоночника называют изменение его нормальной конфигурации. В норме позвоночник имеет характерные изгибы шейного и поясничного отдела вперед, а

Кому назначается ПЦР?

Определение инфекции ВИЧ при помощи ПЦР по рекомендации специалиста производят в следующих случаях:

• предварительное диагностирование. ПЦР безошибочно подтверждает или опровергает результат ИФА;
• иммуноблоттинг подтвердил диагноз. Иммунный блоттинг является дополнительным способом исследования СПИДа. Оба метода применяются совместно, что позволяет исключить вероятность постановки ошибочного диагноза;
• при подтвержденном ВИЧ-статусе с помощью ПЦР отслеживают эффект от проведения выбранного лечения;
• для анализа крови доноров на присутствие ВИЧ-антител;
• для определения ВИЧ-статуса у новорожденного, когда мать имеет положительный результат. ПЦР в первые дни жизни позволяет определить внутриутробное инфицирование или заражение младенца при прохождении по родовым путям. Тест проводится на 2 – 3 неделе после рождения.

Сколько времени делается анализ ПЦР, и где его можно сдать?

Анализ ПЦР на ВИЧ проводится в специальной лаборатории. Сам тест и трактовка результата не требует много времени: месяца и даже недели. Для взятия крови необходимо до 6 минут. В обычном случае специалисту, чтобы поставить диагноз и выдать заключение, потребуется не больше суток. Первые 8 часов происходит изучение крови, оставшееся время уходит на оформление. Результат можно будет забрать уже на следующий день после взятия пробы. Срок проведения экспресс-тестирования – 2 часа.

Внимание! Полис ОМС дает возможность прохождения теста бесплатно в государственном учреждении здравоохранения.

Почти любая коммерческая лаборатория способна провести исследование, причем, на анонимной основе. Человеку присваивают специальный номер, к которому затем привязывают результаты. Данная информация заливается на сайт учреждения в личный кабинет пользователя.

Сколько стоит сдать ПЦР-исследование?

Данный способ проведения исследований является достаточно дорогим. Связано это с тем, что проводить ПЦР необходимо на новейшем медицинском аппарате, манипуляция требует от специалистов достаточного багажа знаний.

Насущный вопрос: сколько же стоит человеку сдать анализ ПЦР на ВИЧ? Для этого потребуется в районе 56-60 долларов.