Что такое анализ ПЦР: преимущества и расшифровка

Показания

Самыми распространенными показаниями к проведению анализа методом полимеразной цепной реакции являются:

• ВИЧ-инфекция;
• вирус герпеса;
• ИППП (ЗППП) – инфекции (заболевания), передающиеся половым путем. Их вызывают такие возбудители, как хламидии, гарднереллы, трихомонады, микоплазмы и уреаплазмы;
• молочница (кандидоз);
• адено-, рино-, парвовирусы;
• цитомегаловирус;
• пикорновирус;
• краснуха;
• мононуклеоз;
• туберкулез;
• гепатиты А, В, С;
• вирус Эпштейна-Барра;
• ВПЧ – вирус папилломы человека.

Данный перечень далеко не полный, поскольку метод ПЦР применяется не только в различных медицинских областях, но и в криминалистике, генетике.

Мазок ПЦР на ИППП является одним из наиболее распространенных и информативных способов исследования в современной медицинской практике. Его результаты помогают не только диагностировать обычное воспаление, но и предотвратить развитие онкологических процессов. Тем не менее, несмотря на простоту и надежность методики, далеко не все осознают необходимость диспансеризации и сдачи анализов, зачастую обращаясь к врачам лишь в запущенных случаях.

Что такое метод ПЦР и чем он хорош

Исследование по этой методике имеет ряд преимуществ, к которым относятся:

• высокая чувствительность, позволяющая найти возбудителя в образце даже при его минимальном присутствии. Анализ показывает точные результаты при наличии всего нескольких патогенных молекул, то есть на самых ранних стадиях, а также в случае хронического и бессимптомного течения заболевания;
• универсальность, благодаря которой можно брать практически любой биоматериал – кровь, назальную слизь из носа или ротоглотки, отделяемое из уретры и влагалища и даже частички кожи;
• широкий спектр применения, позволяющий в одной пробе найти несколько разных болезнетворных возбудителей;
• быстрота – результаты готовы через 5-7 часов, поэтому в большинстве случаев их получают на руки уже на следующий день после сдачи теста;
• точность – диагностические ошибки возможны только при нарушении техники забора материала;
• доступная цена, сопоставимая со стоимостью стандартных лабораторных исследований крови.

ПРИМЕЧАНИЕ: идеальных методов не бывает, и минусом ПЦР является требование к чистоте образцов. Любые загрязнения могут привести к получению как ложноположительных, так и ложноотрицательных итогов. В связи с этим сдавать анализ лучше в известных клиниках, где работают профессиональные лаборанты, и используются современные системы проверки качества.

У женщин

Мазок на ПЦР у женщин берут врачи-гинекологи в ходе планового или внепланового осмотра, если есть какие-то жалобы. Это необходимо для ранней диагностики скрытых инфекций и проверки состава флоры.

Забор биоматериала осуществляется с влагалищных стенок, шейки и цервикального канала матки. По результатам анализа можно сделать вывод о состоянии клеток эпителия женских органов и наличии вредоносных бактерий, вызывающих венерические болезни.

Гинекологи рекомендуют сдавать такой мазок систематически, хотя бы раз в год даже при отсутствии симптомов. Многие ИППП способны достаточно долго протекать скрыто и никак не проявляться.

ПЦР-тест обязательно делают при таких признаках, как зуд, жжение, боли и нетипичные выделения из половых органов. Причем болеть могут как наружные гениталии, так и нижняя часть живота. Обычно указанные симптомы говорят о развитии патологии, которую можно определить лишь посредством влагалищного мазка. Последний также целесообразно взять в случае незащищенного полового контакта с малоизвестным партнером ввиду вероятности заражения ЗППП.

Мазки в обязательном порядке сдаются женщинами на этапе планирования беременности или подготовки к ЭКО и процедурам ВРТ – вспомогательной репродуктивной технологии. У беременных мазки исследуются три раза на протяжении всего периода гестации, так как инфекции могут передаваться от матери плоду, осложнять родоразрешение и даже провоцировать выкидыш.

ПЦР у мужчин

Забор мазка из уретры – один из тех анализов, которых так боятся многие мужчины. Между тем страх в значительной степени порожден незнанием: вместо того чтобы спросить уролога, пациенты задают вопросы знакомым, обсуждают эту тему на форумах, советуются с друзьями и даже незнакомыми людьми.

Если у женщин мазок берут из влагалища и цервикального канала, то у мужчин забор биоматериала производится из уретры. Он так и называется – уретральный мазок. Его назначают в ходе осмотра урологом, при наличии симптомов мочеполовой инфекции, хроническом воспалении органов урогенитальной системы, а также при обнаружении инфекции у жены/подруги.

Показания к проведению уретрального анализа:

• нехарактерные выделения из мочеиспускательного канала;
• боль при походах в туалет либо после мочеиспускания;
• припухлость, покраснение и сыпь на коже паховой зоны;
• частые позывы к мочеиспусканию;
• воспалительные патологии мочеполовых органов – уретрит, простатит, везикулит и др.;
• предварительный диагноз «гонорея», «хламидиоз», «микоплазма», «уреаплазма», «трихомониаз» и другие, связанные с ИППП;
• бесплодие;
• обнаружение инфекции у партнера.

Так же как женщины, мужчины сдают общий мазок на микрофлору и скрытые инфекции. Общий анализ выявляет уровень лейкоцитов, присутствие разных микробов, внутриклеточных паразитов, микозов и простейших.

Но конкретный тип возбудителя он не определяет, и за обобщающим термином «кокковая флора» могут скрываться стафило- и стрептококки, а также множество других микроорганизмов. Именно для уточнения разновидности патогена делают тест на скрытые инфекции. Он бывает качественным, когда выдается однозначный результат «да-нет», и количественным, с определением объема инфекции.

Что такое ПЦР

Полимеазная цепная реакция является экспериментальным методом молекулярной биологии, результативно применяющимся сегодня в медицине.

Суть исследования заключается в том, что при помощи особенных ферментов многократно умножаются фрагменты ДНК возбудителей заболевания во взятых пробах биоматериала. Это позволяет выявить вид вируса, а также его количество. Исследование проводят как для диагностики, так и для контроля за процессом лечения.

В науке полимеразная цепная реакция позволяет клонировать и выделять новые гены, исследовать мутации и т.п.

Метод ПЦР-диагностики имеет ряд преимуществ:

• Точность (90-95%).
• Оперативность (12-24 часа).
• Ранняя диагностика заболеваний.
• Чувствительность.
• Большой выбор материалов для проведения анализа.
• Универсальность.

Недостатком можно считать высокую стоимость анализа.

За изобретение данного метода диагностики в конце прошлого века американский ученый Кэрри Мюллис был удостоен Нобелевской премии.

Какие заболевания диагностируют методом ПЦР

Полимеразная цепная реакция позволяет с высокой точностью определить следующие инфекции:

• Гепатит В и С.
• Уреаплазмоз.
• Хламидиоз.
• Молочницу.
• Микоплазмоз.
• Гарднереллез.
• Сальмонеллез.
• Папилломавирус.
• Герпес.
• Трихомониаз.
• Дифтерия.
• Онковирусы.
• COVID-19.

Также этим методом производится тест на отцовство.

Врачи рекомендуют проводить процедуру в случае появления выделений неестественного характера, зуда или жжения в области половых органов, а также после случайного незащищенного полового контакта. После выявления вида возбудителя нередко назначают дополнительные анализы для определения оптимального курса терапии.

Виды

Гинекологические мазки бывают 3-х видов, отличающихся между собой целью исследования. Это может быть микрофлора, скрытые инфекции и начальные стадии онкологических процессов, которые еще называют предраковыми состояниями.

На микрофлору

Мазок на флору, или общий мазок, нужен для определения «чистоты» женского влагалища. Он покажет наличие воспаления или грибкового поражения и позволит выявить кандидоз (молочницу), вагинит, вагиноз и цервицит.

Кроме этого, в общем мазке обнаруживаются некоторые возбудители ЗППП – в частности, гонококки и трихомонады. В основе исследования лежит свойство разных патогенных организмов окрашиваться в разные цвета в зависимости от их чувствительности к антибиотикам.

Способность изменять цвет открыл врач из Дании Грам, в честь которого получили названия микроорганизмы с высокой и низкой восприимчивостью к воздействию антибактериальных препаратов. Первые стали называться грамположительными, вторые – грамотрицательными.

Факт: У грамотрицательных бактерий более тонкая и сложная оболочка, и они могут вызывать развитие разных патологий женской репродуктивной системы.

В ходе исследования лаборант смотрит в микроскоп и считает, сколько в образце разноцветных микробов и лейкоцитов, какова их форма, величина и местонахождение. Иногда анализируются неокрашенные пробы для того, чтобы найти трихомонады жгутиковых форм.

В рамках ПЦР-теста могут делать посев на флору: образец помещают в специфическую питательную среду с желатином и спустя какое-то время изучают результат. Посев применяется в случаях, когда инфекционного возбудителя очень мало, и под микроскопом нельзя определить его тип.

Примечание: Продолжительность культивирования посева на флору зависит от того, какой патоген подозревается. Наиболее долго – две недели – зреет посев при хламидиозе.

Если на питательном субстрате появляются колонии микробов, то речь идет об имеющейся болезни. Бакпосев может проводиться также при разработке терапевтической тактики, так как в период созревания колонии есть возможность выяснить, к каким антибиотикам она особенно чувствительна.

На скрытые инфекции

Скрытыми инфекциями считают заболевания, способные протекать в латентной, бессимптомной форме длительное время. Это может продолжаться несколько месяцев и даже лет, что в результате нередко приводит к серьезным последствиям, включая бесплодие.

В настоящее время самым точным методом обнаружения скрытых инфекций является анализ мазков, который проводится посредством ПЦР. Он же применяется для выявления возбудителей, не присутствующих в общих мазках.

Биоматериал берется из влагалища, мочеиспускательного канала или шейки матки, после чего в несколько этапов увеличивается концентрация нуклеиновой кислоты, и копируются отдельные элементы ДНК микробов, которые есть в образце.

По результатам специалист может установить тип микроорганизмов и их способность вызывать болезни. Практически всегда тест ПЦР используется для выявления ИППП с бессимптомным течением на начальных стадиях.

На онкоцитологию – тест по Папаниколау, или пап-тест

Этот анализ применяется для обнаружения онкологических процессов на ранних стадиях их развития, чтобы как можно быстрее начать лечение. Мазок на онкоцитологию позволяет выявить большинство патологий воспалительного характера, а также дисплазию эндометрия и раковые опухоли в зачаточном состоянии.

Сдавать пап-тест необходимо всем женщинам 21-65 лет при плановом обследовании каждый год. При расстройстве менструального цикла, воспалении цервикального канала, бесплодии он назначается обязательно.

Сделать анализ на онкоцитологию рекомендуется в ходе обследования по поводу сахарного диабета, ожирения, при лечении гормональными препаратами. Он необходим женщинам с подтвержденным диагнозом «герпес» и «ВПЧ», а также тем, кто планирует беременность.

Результаты ПЦР-анализа могут быть 5 видов:

• 1 – все в порядке, отклонений нет;
• 2 – есть воспаление, которое надо лечить;
• 3 – среди эпителиальных клеток обнаружены единичные экземпляры с неправильной структурой ядра;
• 4 – есть основания подозревать злокачественный процесс либо эрозивное поражение шейки матки, генитальный герпес, ВПЧ (вирус папилломы человека). Можно также получить подтверждение ороговения слизистой маточной оболочки, связанное с воздействием внешних или внутренних повреждающих факторов (паракератоз);
• 5 – развивается онкологический процесс, необходимо безотлагательное лечение.

Результаты мазка на онкоцитологию показывают лишь патологические изменения в клетках, а не вызвавшую их причину. Поэтому необходимо дополнительное обследование для уточнения диагноза. С этой целью врач может назначить проведение кольпоскопии, биопсии с последующим гистологическим исследованием и другие анализы.

При обнаружении «неправильных» клеток в заключение будет обозначено, как именно они изменены. В случае отсутствия особых замечаний можно говорить о том, что женщина здорова.

Расшифровка анализа ПЦР

Процесс интерпретации результатов простой:

1. Если поставлен отрицательный маркер – это значит, что заболевание исключено, в исследуемом материале инфекционный возбудитель отсутствует.
2. Положительный ПЦР – обследование выявило ДНК или РНК возбудителя инфекции.

Иногда расшифровка дополняется количественным определением. Информация актуальна для болезней, вызываемых условно-патогенными штаммами. Они провоцируют развитие патологии только при превышении стандартного количества колоний. Кроме того, количественная реакция необходима тогда, когда проводится определение терапевтической тактики лечения и нужен контроль клинической картины патологии.

ПЦР – это кровь или мазок

Диагностика методом ПЦР выполняется на основе разных биоматериалов, выбор которых зависит от разновидности предполагаемого возбудителя. Если проводится анализ на ИППП, берут соскоб со стенок влагалища или шейки матки, уретры, а также исследуют мочу.

Кровь сдается при подозрении на герпетическую инфекцию, цитомегаловирус, гепатит, токсоплазмоз и ВИЧ. Тест на коклюш требует забора материала из зева. Ликвор – цереброспинальная жидкость – необходим для диагностики неврологических болезней.

Факт: Коронавирус 2020 тоже выявляют посредством взятия мазка, материалом для которого служит муконазальный секрет.

Инфекции плода у беременных определяются на основе анализа тканей плаценты, диагностика легочных поражений проводится путем взятия мокроты и плевральной жидкости.

Правила сдачи и расшифровка

Каждый пациент должен знать, что точность результата любого анализа зависит от соблюдений правила сдачи биоматериала. Способ и правила сдачи анализа определяются видом теста. Если вам нужно сдать кровь, на забор нужно приходить утром на голодный желудок. Если необходимо исследование на половые инфекции, следует соблюдать половой покой минимум сутки до забора материала. Забор мочи также требует соблюдение определенных правил. Мочу нужно собирать во время первого утреннего мочеиспускания. Собрать надо среднюю мочу, перед этим нужно помыться и вытереться чистым полотенцем. Посуда должна быть стерильной.

Расшифровка результата исследования не представляет особой сложности. В молекулярной ДНК РНК диагностике методом ПЦР результат может быть только положительным или отрицательным. На бланке лаборатории напротив каждой инфекции, на которые было проведено исследование можно увидеть знак «+» или «-». Соответственно «+» это положительный результат, который говорит о том, что в исследуемом материале найдены следы данной инфекции.

При расшифровке анализа очень важно определить количественное соотношение клеток вируса. Не всегда наличие инфекции можно расценивать как заболевание. Есть такое понятие как носительство инфекции. Это значит, что у человека есть клетки инфекции, но он этой болезнью не болеет. Однако такое носительство не уберегает от возможности заражения других людей. Именно количественный анализ помогает врачам определить, являетесь вы носителем или больным, а также идентифицировать стадию заболевания и подобрать эффективную терапию.

ПЦР-мазок из зева

Показания для забора биоматериала из ротоглотки (так называют зев):

Кровь на ПЦР

• устройство на работу в пищевую отрасль, детские и лечебные учреждения;
• комплексное обследование беременных, которое проводится для предотвращения развития инфекций, опасных для матери и/или плода;
• поступление ребенка в детский сад или школу, выполняемое с целью исключения вспышек инфекции среди детей и подростков;
• оперативное вмешательство на ЛОР-органах;
• ангина бактериальной природы. Анализ позволяет не только определить возбудителя, но и оценить степень его патогенности для предупреждения таких осложнений, как ревматизм, миокардит и гломерулонефрит;
• исключение дифтерии при воспалительных процессах в носо- и ротоглотке;
• подозрение на менингит или коклюш;
• фурункулез и пиодермия, вызванные золотистым стафилококком;
• определение чувствительности к антибиотикам;
• предварительный диагноз «мононуклеоз», «стенозирующий ларингит», а также абсцессы в области миндалин.

Подготовка

Женщины должны сдавать анализ с учетом менструального цикла – перед началом месячных или через несколько дней после их окончания. Это позволит избежать попадания крови в образцы. Правила подготовки включают отказ от:

• спринцевания;
• применения вагинальных суппозиториев, мазей перед взятием мазка;
• половых контактов за сутки-двое до анализа;
• использования средств интимной гигиены в течение суток до взятия мазка;
• мочеиспускания непосредственно перед сдачей.

При наличии воспаления с большим количеством выделений сдавать анализ нужно после выздоровления и вначале пройти курс лечения. Никаких ограничений по питанию или физической активности нет.

Для мужчин действуют те же правила. 1-2 дня следует воздержаться от половых контактов. Накануне сдачи анализа – принять душ, перед процедурой желательно не мочиться 2-3 часа. Моча смывает с поверхности мочеиспускательного канала вредоносные микробы и клетки. В течение нескольких часов они опять появляются, и в области уретры скапливается отделяемое в количестве, достаточном для исследования.

После проведения анализа мазка пациент получает результаты, которые полностью зависят от типа назначенного исследования.

Как берется анализ ПЦР

Для диагностики могут браться разные виды биоматериала. Рассмотрим особенности подготовки и проведения исследования в зависимости от этого.

• Кровь. Для анализа ПЦР берется венозная кровь в вакуумную пробирку типа Vacutainer. В пробирке лаборант перемешивает кровь с антикоагулянтом. До исследования кровь в пробирке хранится при температуре +4°С.
• Пациенту нужно прийти в поликлинику натощак и не курить, чтобы не исказить результаты исследования.
• Моча. В специальный стерильный контейнер отбирается средняя утренняя моча в количестве 50 мл. За сутки до сдачи анализа нужно исключить половые контакты.
• Слюна. Этот биоматериал в количестве 5 мл собирают в одноразовую пробирку непосредственно перед исследованием. Перед процедурой пациенту предлагается прополоскать рот физиологическим раствором.
• Мазок из зева. Лаборант производит мазок с задней стенки ротоглотки, а также с миндалин, используя одноразовый аппликатор, который затем кладет в стерильный контейнер. Перед этой процедурой желательно не принимать пищу и не пить несколько часов.
• Синовиальная жидкость. Специалист производит забор синовиальной жидкости (1 мл) из полости сустава одноразовым шприцом.Биоматериал помещают в стерильную пробирку Eppendorf.
• Анализ на урогенитальные инфекции. У женщин и у мужчин мазки и соскобы берутся по-разному. В первом случае биоматериал может браться из уретры, цервикального канала или заднего свода влагалища. Для этого специалист использует ложку Фолькмана или универсальный зонд. Инструмент со взятым материалом помещают в одноразовую пробирку Eppendorf. Для взятия анализа из уретры у мужчин лаборант использует универсальный зонд или цитощетку. Сок предстательной железы после пальцевого массажа собирают в количестве 1 мл в стерильную пробирку. В некоторых случаях, при невозможности получения сока, после пальцевого массажа берут первую порцию мочи (10 мл).

Нужна ли подготовка

Подготовка к ПЦР-анализу на урогенитальные инфекции несложная. Женщинам нужно выбирать период до менструации или через 2 дня после ее окончания. За несколько дней исключить спринцевание, а также использование вагинальных таблеток, мазей и свечей.

Пациентам обоих полов рекомендуется:

• Не жить половой жизнью сутки перед проведением исследования.
• Не мочиться за 2 часа до сдачи анализа.
• Не принимать антибиотики за3 недели до процедуры.
• В день проведения анализа не проводить гигиенические манипуляции.

В современных клиниках пациентам предлагают готовые пакеты анализов ПЦР на инфекции, передающиеся половым путем – например, на 5 или 13 инфекций.

При проведении анализа ПЦР (как во время забора материала, так и во время транспортировки) очень важно соблюдать стерильность и необходимый температурный режим, в противном случае есть вероятность получить искаженные результаты.

Нормальные значения результатов

В норме результаты ПЦР-анализа на флору у женщин будут следующими:

В заключение к исследованию у мужчин указывается уровень клеток эпителия, лейкоцитов, кокков и выявленных чужеродных микроорганизмов. В норме лейкоцитов должно быть 0-5, эпителиальных клеток – 5-10, умеренное количество слизи. Трихомонад и гонококков присутствовать не должно.

При повышении концентрации лейкоцитов и эпителиальных клеток, наличии эритроцитов и значительного количества слизи можно говорить о развитии воспаления. Признаками патологий являются обнаруженные бактерии, дрожжевые грибки, трихомонады, гонококки, внутриклеточные паразиты.

Примечание: Окончательный диагноз на основании результатов анализов ставит только врач.

Советы, что делать, если процедура взятия мазка оказалась травматичной

Совет №1

У мужчин после забора мазка из уретры могут быть дискомфортные ощущения в течение 1-2 дней. Их интенсивность бывает разной, от легкого раздражения до выраженной болезненности. Это объясняется небольшим повреждением слизистой, которая реагирует на попадание мочи.

Из-за боли пациенты стараются меньше пить, чтобы реже ходить в туалет. Но так делать не стоит, поскольку более концентрированная моча сильнее раздражает кожу.

Совет №2

Для женщин процедура, как правило, проходит без последствий, хотя иногда бывают легкие боли при соскобах с шейки матки. А вот забор мазка на онкоцитологию способен вызвать кровянистые выделения на 1-2 дня.

Если кровотечение не останавливается и даже усиливается, поднимается температура тела, болит живот, то нужно как можно скорее обратиться к гинекологу. Такие симптомы нормальными не являются.